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高效液相色譜儀的系統(tǒng)組成、工作原理
高效液相色譜儀一般都具備貯液器、高壓泵、梯度洗提裝置(用雙泵)、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、恒溫器、記錄儀等主要部件。與經(jīng)典液相柱色譜裝置比較 高效液相色譜,具有高效、快速、靈敏等特點(diǎn),高效液相色譜以經(jīng)典的液相色譜為基礎(chǔ),是以高壓下的液體為流動(dòng)相的色譜過程。高效液相色譜分析的流程如下:
高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。高壓泵將儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,溶解于流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相) 內(nèi),因?yàn)闃悠啡芤褐械母鹘M分在固定相和流動(dòng)相中具有不同的分配系數(shù), 在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí), 經(jīng)過反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過程, 各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別, 被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出, 通過檢測(cè)器時(shí), 樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。遇到復(fù)雜的混合物分離(極性范圍比較寬)還可用梯度控制器作梯度洗脫。
高效液相色譜的分離過程 HPLC,它借溶質(zhì)在兩相間分配系數(shù)、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質(zhì)得以分離。
與經(jīng)典的液相色譜相比,具有高效液相所用的固定相粒度小(5um-10um)、傳質(zhì)快、柱效高的優(yōu)勢(shì)。近年來,在保健食品功效成分、營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑、維生素類、蛋白質(zhì)的分離測(cè)定等應(yīng)用廣泛。世界上約有80%的有機(jī)化合物可以用HPLC來分析測(cè)定。
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